جداسازی راه انداز اختصاصی ریشه چغندرقند

راه اندازها نقش اساسی در رونویسی و بیان ژنها دارند. تا زمانیکه راه انداز ژن توسط rna پلیمراز مورد شناسایی قرار نگیرد، رونویسی و در نتیجه بیان ژن به وقوع نمی پیوندد. بعضی از ژنها دارای بیان اختصاصی در اندام، بافت و یا شرایط محیطی متفاوت هستند، کلید این بیان اختصاصی در دست راه اندازهای اختصاصی قرار دارد که در اندام، بافت و یا شرایط محیطی خاص فعال می گردند، همین امر ضرورت شناسایی و جداسازی راه اندازهای اختصاصی را نشان می دهد. به دلیل اهمیت چغندرقند به عنوان یک گیاه صنعتی و اقتصادی، این تحقیق روی گیاه مزبور انجام شد. از آنجا که ریشه این گیاه بخش اقتصادی و مورد استفاده آن را تشکیل می دهد شناسایی و جداسازی راه اندازهای اختصاصی آن هدف اصلی این تحقیق می باشد بطوریکه برای تغییر ویژگیهای خاص آن و همچنین پروژه های انتقال ژن مورد استفاده قرارگیرد. در این تحقیق ابتدا اطلاعات مربوط به راه اندازهای اختصاصی ریشه در گیاهان مختلف جمع آوری شده و با راه اندازهای اختصاصی ریشه چغندر از نظر توالی نوکلئوتیدی مورد مقایسه قرار گرفت، سپس با استفاده از قسمتهای مشترک و مورد نظر این راه اندازها، آغازگرهایی طراحی وبرای تولید سفارش داده شد. برای دسترسی به نواحی مورد نظر از ژنوم گیاه چغندرقند، واکنش زنجیره ای پلیمراز با استفاده از آغازگرهای اختصاصی انجام پذیرفت. بدین منظور ابتدا با استفاده از روش ctab، dna گیاه چغندرقند استخراج و به عنوانdna الگو در pcr مورد استفاده قرار گرفت. بعد از تکثیر قطعات مورد نظر، این قطعات در پلاسمید های pbluescript و pgemt-easy همسانه سازی شدند. پیرو درج قطعه در پلاسمید ها از طریق تراریختی باکتریایی، باکتریهای تراریخت تولید و پلاسمیدهای تکثیر یافته در آنها از طریق آنزیمهای برشی مورد تایید قرار گرفته و نهایتاً برای تعیین توالی آنها اقدام گردید. در پایان توالیهای حاصله مجدداً مورد بررسیهای بیوانفورماتیکی قرار گرفته و نتیجه گیری لازم یعنی شباهت قطعات همسانه سازی شده با اطلاعات موجود در ncbi و همچنین عدم وجود تفاوت در نواحی مهم همانند utr مورد تایید قرار گرفت.